ICS65.020 B04 DB32 江苏省地方标准 DB32/T3171—2017 农产品产地环境水中Hg(II)的测定 酶联免疫法 Determination of Hg(II) in water of agricultural producing area by enzyme-linked immunosorbent assay 2017-01-20发布 江苏省质量技术监督局发布 2017-03-20实施 前言 本标准按GB/T1.1—2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构及编写》的规定编写。本标准由南京农业大学提出。本标准起草单位：南京农业大学、江苏省农业科学院。本标准主要起草人：刘风权、王利民、张存政、王鸣华、华修德、孙远明。 1 范围 本标准规定了农产品产地环境水中Hg(II)的酶联免疫检测方法。 本标准适用于农产品产地环境水中Hg(II)的在线筛查和快速监测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用；凡不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 3 原理 采用间接竞争ELISA方法，在微孔板上包被Hg(II)包被抗原，检测样品中Hg(II)与包被抗原竞争汞抗体。加入酶标羊抗鼠二抗后显色，终止反应。用酶标仪测定450nm处吸光值（OD450），吸光值与样品中Hg(II)残留量呈负相关。 4 试剂与设备 4.1 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682三级水要求。 4.2 Hg(II)酶联免疫检测试剂盒包括：阳性参考品、阴性参考品、检测液、Hg(II)抗体溶液、酶标二抗溶液、底物溶液、终止溶液及包被Hg(II)抗原的96孔微孔板（真空密封）。 试剂盒性能要求：对农产品产地环境水中Hg(II)检测限为0.001 mg/L；阳性符合率≥90%，阴性符合率≥90%；假阴性率≤5%，假阳性率≤5%；对Cd(II)、Pb(II)、Cr(II)、As(III)、Cu(II)、Zn(II)、Mn(II)、Fe(III)等重金属离子交叉反应均小于1%。试剂盒在4℃保存，有效期180天。 4.3 酶标仪：用于测定OD450值。 5 试样准备 采集水样经过滤后，与检测液等体积混合，备用待测。 6 测定 6.1 按检测样品数量取出所需微孔板条。 6.2 用检测液将抗体溶液稀释100倍，与样品等体积混合后，每孔加入50μL，同时设置阴性参考品2孔、阳性参考品2孔及空白对照1孔（空白孔不加抗体）。37℃孵育45min后洗板。 6.3 用检测液将酶标二抗溶液稀释100倍，每孔加入50μL，37℃孵育30min后洗板。 6.4 每孔加入50μL底物溶液，37℃孵育10min。 6.5 每孔加入25μL终止液，并在5min内测定OD450值。 7 结果判定 根据阳性参考品、阴性参考品及空白对照OD450值进行判定： 当阳性参考品OD450平均值≤0.8或阴性参考品OD450平均值≥0.1时结果无效；样品OD450值/阳性参考品OD450平均值≤0.9判定为阳性；>0.9判定为阴性。