ICS 67.050
X04
DB64
宁夏回族自治区地方标准
DB64/T 1682-2019
包装饮用水中铜绿假单胞菌的快速检测方法
2019-12-18发布
2020-03-17实施
宁夏回族自治区市场监督管理厅发布

前言
本标准按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则编写。本标准由宁夏回族自治区食品检测研究院提出，由宁夏回族自治区市场监督管理厅归口并组织实施。本标准起草单位：宁夏回族自治区食品检测研究院、宁夏回族自治区食品药品审评查验中心。本标准主要起草人：邓军、高俊峰、夏莉娟、冯秀娟、赵艳、李雯、董川。

1 范围
本标准规定了包装饮用水、饮用天然矿泉水中铜绿假单胞菌检测的环介导恒温核酸扩增（LAMP）方法。本标准适用于包装饮用水及饮用天然矿泉水中铜绿假单胞菌的定性检测。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。
GB 8538-2016 食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB 19489 实验室生物安全通用要求
GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测

3 缩略语
DNA（deoxyribonucleic acid）：脱氧核糖核酸
dNTP（deoxyribonucleoside triphosphate）：脱氧核苷三磷酸
LAMP（loop-mediated isothermal amplification）：环介导恒温扩增
OprL：编码OprL蛋白（肽聚糖相关外膜脂蛋白）的基因
Triton X-100：聚乙二醇辛基苯基醚

4 生物安全措施
按照GB 19489中的有关规定执行。

5 防污染措施
防止污染措施应符合GB/T 27403的规定。

6 原理
根据铜绿假单胞菌特异OprL基因序列（参见附录A），设计两对内、外引物及一对环状引物，特异性识别靶序列上的六个独立区域。利用Bst DNA聚合酶启动循环链置换反应，在63℃恒温条件下实现目标基因扩增。Bst DNA聚合酶具有强链置换能力，在铜绿假单胞菌OprL特异基因序列上启动互补链合成，在同一链上不断形成互补结构，反复循环生成类似花椰菜结构的茎环DNA混合物。