ICS 67.050
X04
DB64
宁夏回族自治区地方标准
DB64/T 1681-2019
食品中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的快速检测方法
2019-12-18发布
2020-03-17实施
宁夏回族自治区市场监督管理厅发布

前言
本标准按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则编写。本标准由宁夏回族自治区食品检测研究院提出，由宁夏回族自治区市场监督管理厅归口并组织实施。本标准起草单位：宁夏回族自治区食品检测研究院、宁夏回族自治区食品药品审评查验中心。本标准主要起草人：冯秀娟、夏莉娟、邓军、高俊峰、董川、赵艳、李雯。

1 范围
本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌检测的环介导恒温核酸扩增（LAMP）方法。本标准适用于食品中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的定性检测。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。
GB 4789.4-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
GB 4789.10-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB 19489 实验室生物安全通用要求
GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测

3 缩略语
DNA（deoxyribonucleic acid）：脱氧核糖核酸
dNTP（deoxyribonucleoside triphosphate）：脱氧核糖核苷三磷酸
femA：金黄色葡萄球菌甲氧苯青霉素耐药相关基因
fimI：沙门氏菌I型菌毛蛋白调控基因
LAMP（loop-mediated isothermal amplification）：环介导恒温扩增
Triton X-100：聚乙二醇辛基苯基醚

4 生物安全措施
按照GB 19489中的有关规定执行。

5 防污染措施
防止污染措施应符合GB/T 27403的规定。

6 原理
利用环介导恒温扩增（LAMP）技术进行金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的筛选检测。根据金黄色葡萄球菌特有的femA基因序列（参见附录A）和沙门氏菌fimI基因序列（参见附录B），分别设计一套特异性引物，特异性识别靶序列上的八个独立区域。利用Bst DNA聚合酶启动循环链置换反应，在金黄色葡萄球菌femA特异基因序列和沙门氏菌fimI特异基因序列上启动互补链合成，在同链上形成互补序列并反复循环，生成类似花椰菜结构的茎环DNA混合物。当发生扩增反应时，体系中添加的染色剂（SYBR Green I）以嵌入方式结合到扩增DNA双链小沟处，随着双链DNA的增加，SYBR1