ICS 71.040.01
A43
DB21 辽宁省地方标准
DB21/T2598-2016
褐藻酸寡糖含量的检测
Determination of the content of alginate oligosaccharides
发布：2016-03-28
实施：2016-05-28
辽宁省质量技术监督局 发布

前言
本标准依据GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》起草。
本标准由中国科学院大连化学物理研究所提出。
本标准由大连市质量技术监督局归口。
起草单位：中国科学院大连化学物理研究所。
主要起草人：赵勇、尹恒、陈玮。

1 范围
本标准规定了褐藻酸寡糖含量检测的术语和定义、原理、仪器、试剂、操作步骤及重复性要求。
本标准适用于从海带、马尾藻、巨藻、泡沫藻等褐藻类植物中提取的褐藻酸盐加工制成的褐藻酸寡糖产品含量测定。

2 术语和定义
2.1 褐藻酸寡糖
2.2 褐藻酸寡糖含量（Content）
指褐藻酸寡糖产品中褐藻酸寡糖的含量。

3 原理
在沸水浴条件下，利用含四硼酸钠的硫酸溶液将样品中的褐藻酸寡糖彻底水解生成糖醛酸。糖醛酸可与间羟联苯试剂发生反应生成紫红色物质，在525 nm波长处具有吸收峰。在吸光度0～1.0范围内，该物质吸光度与糖醛酸浓度呈线性关系。通过测定吸光度计算糖醛酸浓度及总质量，再由糖醛酸总质量与样品总质量计算褐藻酸寡糖含量。

4 仪器
4.1 分光光度计
4.2 分析天平（感量0.0001g）或电子天平（感量0.01g）
4.3 水浴锅
4.4 涡旋混合振荡器
4.5 恒温干燥箱

5 试剂
5.1 去离子水
5.2 浓硫酸（分析纯）
5.3 半乳糖醛酸（色谱纯，纯度≥98%）
5.4 氢氧化钠（分析纯）
5.5 十水合四硼酸钠（分析纯）
5.6 间羟联苯（优级纯，纯度≥98%）
5.7 0.1 g/L半乳糖醛酸标准溶液：称取0.10g半乳糖醛酸，用去离子水溶解并定容至1L。
5.8 120 mM四硼酸钠-硫酸溶液：将四硼酸钠溶于浓硫酸中配制并定容。
5.9 0.5%氢氧化钠溶液：氢氧化钠溶于去离子水后定容。
5.10 0.15%间羟联苯试剂：用氢氧化钠溶液溶解间羟联苯并定容，避光保存。

6 操作步骤
6.1 样品处理
待测样品若为固体需先经恒温干燥箱处理。

6.2 标准曲线制作
6.2.1 取10mL试管，加入0～0.4mL半乳糖醛酸标准溶液，用去离子水定容至0.4mL，得到0～100μg/mL梯度溶液。
6.2.2 将试管置于冰水浴预冷3～5min，加入2.4mL四硼酸钠-硫酸溶液，振荡后置沸水浴反应20min，冷却至室温。
6.2.3 加入80μL间羟联苯试剂，振荡后室温放置10min。
6.2.4 在525nm波长下测定吸光度（A525）。
6.2.5 以半乳糖醛酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

6.3 样品测定
6.3.1 称取0.050g样品溶于25mL水中，定容至1L制备0.05g/L样品溶液。
6.3.2 取0.4mL样品溶液进行与标准曲线相同的显色及水浴反应步骤。