ICS 11.220 B41 备案号：49686-2016 DB21 辽宁省地方标准 DB21/T 2592.1—2016 鸡传染性疾病检测方法 第1部分：鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR检测方法 Testing method of chicken infectious disease Part 1: The testing method of real-time fluorescent RT-PCR for chicken infectious bursal disease virus 2016-03-18发布 2016-05-18实施 辽宁省质量技术监督局发布 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 《鸡传染性疾病检测方法》分为三个部分：鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR检测方法；鸡传染性支气管炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法；鸡马立克氏病毒实时荧光PCR检测方法。 本标准为《鸡传染性疾病检测方法》的第1部分。 本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。 本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。 本标准起草单位：辽宁省动物医学研究院、辽宁省动物疫病预防控制中心。 本标准主要起草人：李井春、顾贵波、石段亚良、闫海滨、李树博、薛树山、王宏燕、孙世宇、齐本等。 1 范围 本标准规定了鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR检测的样品采集、制样、核酸提取及结果判定等操作方法。 本标准适用于活禽及其产品中鸡传染性法氏囊病的检测。 2 规范性引用文件 GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18936—2003 高致病性禽流感诊断技术 GB/T 19438.1—2004 相关禽病检测技术标准 3 缩略语 RT-PCR：反转录-聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction） Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时的循环数（cycle threshold） RNA：核糖核酸（ribonucleic acid） DEPC：焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate） PBS：磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline） 4 材料与试剂 4.1 材料 荧光RT-PCR检测仪； 台式离心机（3000 r/min）； 混匀器、2℃~8℃及-20℃冰箱； 微量可调移液器（10 μL、100 μL、1000 μL）及滤芯吸头； 1.5 mL Eppendorf管； 高速冷冻离心机（≥12000 r/min）。 4.2 试剂 病毒总RNA提取试剂Trizol； 氯仿（-20℃预冷）； 异丙醇（-20℃预冷）； PBS缓冲液等（按相关标准配制）。 5 采样与样品处理 5.1 采样工具 5.2 样品来源 包括活禽样品及病料采集等。 5.3 样品类型 5.4 样品制备 包括咽喉拭子、泄殖腔拭子、肌肉或组织器官样品等。 5.5 样品保存 6 RT-PCR操作方法 6.1 实验室分区设置与管理 6.2 样品处理 6.3 RT反应 6.4 PCR扩增 7 结果判定 7.1 结果分析条件设定 7.2 质控标准 7.3 结果解释与判定 7.3.1 阴性 7.3.2 阳性 7.3.3 有效原则 附录A（规范性附录）磷酸盐缓冲盐水（PBS）配方 附录B（规范性附录）鸡传染性法氏囊病毒RT-PCR检测实验室设置与管理要求