DB22/T2972—2019 羊泰勒虫病病原检测 PCR法
PCR assay for detection of Theileria ovis
发布日期：2019-05-27 | 实施日期：2019-06-17
归口单位：吉林省畜牧业管理局
发布单位：吉林省市场监督管理厅

前言
本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2015给出的规则起草。本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。
本标准起草单位：延边大学、吉林农业科技学院、吉林省动物疫病预防控制中心。
本标准主要起草人：贾立军、田万年、柴方红、梁晚枫、陈健、王海军、王欣睿、李国峰。

1 范围
本标准规定了羊泰勒虫病病原PCR检测方法原理、试剂和仪器、样品采集、操作步骤和判定结果。本标准适用于绵羊泰勒虫病病原检测。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 原理
双链DNA在高温加热的作用下变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则，通过人工合成的特异性寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链，再利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸（dNTPs）合成新生的DNA互补链，进而完成特定片段的体外扩增。

4 试剂和仪器
4.1 试剂
除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682中一级水的要求。
4.1.1 血液DNA提取试剂盒
4.1.2 10×PCR缓冲液
4.1.3 dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)，浓度2.5 mmol/L
4.1.4 Taq DNA聚合酶，浓度5 U/μL
4.1.5 50×TAE缓冲液，见表A.1
4.1.6 10 mg/mL 溴化乙锭，见表A.2
4.1.7 1% 琼脂糖凝胶，见表A.3
4.1.8 加样缓冲液，见表A.4
4.1.9 阴性对照为健康绵羊血液DNA提取物
4.1.10 空白对照为灭菌双蒸水
4.1.11 DNA Marker分子量标准

4.2 耗材
4.2.1 抗凝管
4.2.2 吸头 (200-1000μL, 20-200μL, 2-20μL, 0.5-10μL)