ICS 13.060 Z 16 DB37 山东省地方标准 DB37/T 3632—2019 渔业用水中多西环素、四环素、土霉素、金霉素残留量的测定 高效液相色谱法 Determination of doxycycline, tetracycline, oxytetracycline, chlortetracycline residues in fishery water by high performance liquid chromatography (HPLC) 2019-07-23发布 山东省市场监督管理局 发布 2019-08-23实施 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由山东省海洋与渔业厅提出并监督实施。 本标准由山东省渔业标准化技术委员会（鲁TC03）归口。 本标准起草单位：济宁市渔业监测站。 本标准主要起草人：史艳伟、孟丽华、时彦民、刘方、吴广州、蒋帮铜、孟娟、邓晨曦、简康。 1 范围 本标准规定了渔业用水中土霉素（Oxytetracycline）、四环素（Tetracycline）、金霉素（Chlortetracycline）、多西环素（Doxycycline）残留量的测定原理、试剂与配制、仪器设备、试样测定、计算、检测限、回收率及精密度等内容。 本标准适用于渔业用水中上述四种四环素类抗生素残留量的测定。 2 规范性引用文件 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 水样经HLB固相萃取柱净化后，采用高效液相色谱仪配紫外检测器进行测定，使用外标法进行定量分析。 4 试剂与配制 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682一级水标准。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 磷酸：色谱纯。 4.4 磷酸二氢钠。 4.5 0.01 mol/L磷酸二氢钠溶液：称取磷酸二氢钠1.56 g，用950 mL水溶解，用磷酸调pH至2.5，再用水定容至1000 mL，经0.45 μm滤膜过滤备用。 4.6 土霉素标准品（CAS：2058-46-0），纯度≥96.0%。 4.7 四环素标准品（CAS：64-75-5），纯度≥94.0%。 4.8 金霉素标准品（CAS：64-72-2），纯度≥99.0%。 4.9 多西环素标准品（CAS：24390-14-5），纯度≥98.0%。 4.10 标准储备液：分别称取各标准品，用甲醇溶解定容，制备土霉素、四环素、多西环素100 μg/mL，金霉素200 μg/mL的储备液，-18℃避光保存，有效期6个月。 4.11 混合标准使用液：取标准储备液定容配制混合标准溶液，0～4℃避光保存，有效期2周。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪（配紫外检测器） 5.2 氮吹仪 5.3 超声波清洗器 5.4 超纯水仪 5.5 涡旋混合器 5.6 分析天平（感量0.0001 g） 5.7 HLB固相萃取柱（60 mg，3 mL） 5.8 抽滤装置 6 试样的测定 6.1 样品制备 水样经0.45 μm滤膜过滤备用。 6.2 样品提取与净化 固相萃取柱依次用甲醇和水活化后，取60 mL过滤水样上柱，流速不超过2 mL/min，用水淋洗后抽干，再用甲醇洗脱，收集洗脱液并氮吹浓缩，最后用流动相复溶定容，经涡旋和超声处理后过滤待测。