ICS 11.220 B41 山东省地方标准 DB37/T 3609—2019 恩诺沙星注射液中磺胺类药物的测定——高效液相色谱法 Determination of sulfonamides in enrofloxacin injection by high performance liquid chromatography 2019-07-23发布 山东省市场监督管理局 发布 2019-08-23实施 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省市场监督管理局提出并监督实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省兽药质量检验所。 本标准主要起草人：冯涛、李有志、刘道中、薄永恒、章安源、徐红玮。 目次 1 范围 2 规范性引用文件 3 原理 4 试剂或材料 5 仪器设备 6 测定步骤 6.1 供试品溶液的制备 6.2 对照品溶液的制备 6.3 仪器参考条件 6.4 定性定量测定 7 数据处理 8 精密度 附录A（资料性附录）恩诺沙星注射液中磺胺类药物分辨率图 附录B（资料性附录）恩诺沙星及各磺胺类药物光谱图 1 范围 本标准规定了恩诺沙星注射液中磺胺类药物的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于恩诺沙星注射液中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺喹啉、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺氯吡嗪钠的测定。 本方法检出限：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺喹啉为1 μg/mL；磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶为2 μg/mL；磺胺甲噁唑为3 μg/mL；磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯吡嗪钠为5 μg/mL。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 恩诺沙星注射液中添加的磺胺类药物经稀释后采用高效液相色谱法（HPLC）分离，二极管阵列检测器检测，通过保留时间及紫外光谱进行定性分析，采用外标法进行定量测定。 4 试剂或材料 除非另有规定，所用试剂均为分析纯，水符合GB/T 6682一级水要求。 乙腈（色谱纯）；三乙胺（分析纯）；磷酸（含量≥85%）。 0.025 mol/L磷酸溶液：称取磷酸2.88 g，溶于水并定容至1000 mL，用三乙胺调节pH至3.0，经0.45 μm滤膜过滤备用。 稀释液：乙腈 + 0.025 mol/L磷酸溶液 = 17:83。 磺胺类药物对照品包括：磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺氯吡嗪钠、磺胺喹啉、磺胺甲噁唑、磺胺对甲氧嘧啶、恩诺沙星、磺胺噻唑等。 有机微孔滤膜：0.45 μm。 5 仪器设备 高效液相色谱仪（配二极管阵列检测器）。 分析天平（感量0.00001 g及0.01 g）。 6 测定步骤 6.1 供试品溶液的制备：取适量样品（约相当于恩诺沙星100 mg），用稀释液定容后稀释、混匀，过滤备用。 6.2 对照品溶液的制备：称取各磺胺类药物对照品100 mg，溶解并定容后再稀释，混匀备用。 6.3 仪器参考条件：采用C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，3.5 μm），流动相为乙腈与0.025 mol/L磷酸溶液梯度洗脱，流速1.0 mL/min，进样量10 μL，柱温30℃。 （表1：梯度洗脱程序）