DB32/T5295—2025 高粱品种鉴定 IDP分子标记法 Identification of sorghum varieties - IDP marker method 前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江苏省农业农村厅提出并组织实施。 本文件由江苏省农作物标准化技术委员会归口。 本文件起草单位包括江苏省农业科学院、中国农业科学院、贵州省旱粮研究所。 本文件主要起草人包括钟小仙、薛文韬、朱莉、高杰、刘智微、陈晓强。 1 范围 本文件规定了利用核酸插入缺失多态性（IDP，Insertion-deletion polymorphism）分子标记进行高粱（Sorghum）品种DNA指纹鉴定的仪器设备及试剂、溶液配制、鉴定位点及使用、参照品种及使用、操作程序、结果统计及结果判定等内容。 本文件适用于粒用高粱的DNA分子数据采集和品种鉴定，甜高粱、苏丹草、高丹草、拟高粱等饲用高粱品种鉴定也可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件仅该日期对应的版本适用；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。 GB/T3543.2 农作物种子检验规程 第2部分：扦样 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T2467 高粱品种鉴定 SSR分子标记法 NY/T2594 植物品种鉴定 DNA分子标记法 总则 3 术语、定义和缩略语 3.1 术语和定义 NY/T2594界定的术语和定义适用于本文件。 3.2 缩略语 bp：碱基对（base pair） CTAB：十六烷基三甲基溴化铵 DNA：脱氧核糖核酸 dNTPs：脱氧核糖核苷三磷酸 EDTA：乙二胺四乙酸 HEX：六氯荧光素 IDP：插入缺失多态性 PCR：聚合酶链式反应 ROX：马来酰亚胺荧光染料 Tag酶：耐热DNA聚合酶 TAE：Tris-乙酸-EDTA缓冲液 TAMRA：罗丹明荧光素 TE：Tris-EDTA缓冲液 TD-PCR：降落PCR（Touch-down PCR） Tris：三羟甲基氨基甲烷 6-FAM：6-羧基荧光素 4 仪器设备及试剂 主要仪器设备及试剂见附录A。 5 溶液配制 溶液配制方法见附录B。 6 鉴定位点及使用 鉴定位点引物序列及相关信息见附录C和附录D。 进行琼脂糖凝胶电泳检测时选择普通引物；进行荧光毛细管电泳检测时选择荧光标记引物，荧光标记位于正向引物5'端，推荐使用6-FAM，并可配合HEX、TAMRA、ROX等荧光标记进行多重电泳。 构建数据库时应使用全部引物；在品种鉴定过程中，按附录C引物顺序逐步检测，当差异位点数能够判定送检样品与参照品种不同时，即可停止检测。