中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4230—2015 副猪嗜血杆菌病检疫技术规范 Quarantine protocol for Haemophilus parasuis disease 2015-05-26 发布，2016-01-01 实施 国家质量监督检验检疫总局 前言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国重庆出入境检验检疫局、南通大学、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。 本标准主要起草人：仇保丰、王昱、宋鸿雁、王春来、高峰、司微、顾炳泉、高逢结、刘文斌、李应国。 1 范围 本标准规定了副猪嗜血杆菌病的临床诊断和实验室检测方法。本标准适用于副猪嗜血杆菌病的诊断和检疫。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 4789.28 食品微生物学检验 染色法、培养基和试剂 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 培养基及试剂 3.1 水：符合 GB/T 6682 中一级水的规格。 3.2 无菌脱纤绵羊血。 3.3 无菌牛血清。 3.4 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NAD)。 3.5 胰蛋白大豆琼脂 (TSA)：见 A.1。 3.6 胰蛋白大豆肉汤 (TSB)：见 A.2。 3.7 巧克力琼脂平板：见 A.3。 3.8 鲜血琼脂平板：见 A.4。 3.9 革兰氏染色液：见 A.5。 3.10 生化用培养基：按 GB/T 4789.28 的规定配制。 3.11 电泳级琼脂糖粉。 3.12 Taq DNA 聚合酶：5 U/μL。 3.13 100 bp DNA ladder Marker (脱氧核糖核酸分子量标准)。 3.14 10 倍浓度 Taq DNA 聚合酶缓冲液 (10×Taq Buffer)：含 15 mmol/L 氯化镁。 3.15 dNTP 混合物：脱氧腺苷三磷酸 (dATP)、脱氧胸苷三磷酸 (dTTP)、脱氧鸟苷三磷酸 (dGTP)、脱氧胞苷三磷酸 (dCTP) 各 2.5 mmol/L。 3.16 引物 (HPS-F: 5'-GTGATGAGGAAGGGTGGTGT-3'; HPS-R: 5'-GGCTTCGTCACCCTCTGT-3')。 3.17 50×TAE 电泳缓冲液：见 A.6。 3.18 6×加样缓冲液：见 A.7。 3.19 溴化乙锭溶液：见 A.8。 3.20 副猪嗜血杆菌标准菌株 (1～15 型)：由指定单位提供。 3.21 金黄色葡萄球菌 (ATCC 25923)。 3.22 猪胸膜肺炎放线杆菌 (ATCC 27088)。 3.23 副猪嗜血杆菌阳性血清：由指定单位提供。 3.24 副猪嗜血杆菌阴性血清：由指定单位提供。 3.25 牛血清白蛋白 (BSA)。 3.26 辣根过氧化物酶标记的兔抗猪 IgG。 3.27 邻苯二胺 (OPD)。 3.28 吐温-20。 3.29 0.1 mol/L PBS 缓冲液：见 A.9。 3.30 包被液：见 A.10。 3.31 洗涤液：见 A.11。 3.32 封闭液：见 A.12。 3.33 底物溶液：见 A.13。 3.34 终止液：见 A.14。 4 设备与材料 4.1 电热恒温水槽。 4.2 恒温培养箱。 4.3 二氧化碳培养箱。 4.4 高压灭菌器。 4.5 生物显微镜。 4.6 微量加样器。 4.7 高速冷冻离心机。 4.8 PCR 仪。 4.9 水平凝胶电泳槽。 4.10 电泳仪。 4.11 凝胶成像系统。 4.12 API NH 鉴定条或类似产品（注：由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名）。 4.13 16S rDNA 细菌鉴定 PCR 试剂盒。 4.14 酶标仪。 4.15 空白酶标板。 5 临床诊断 5.1 临床症状及病理变化 5.1.1 临床症状 副猪嗜血杆菌病又称猪的革拉氏病 (Glasser's Disease)，临床表现以呼吸道症状、跛行、胸膜炎、心包炎、腹膜炎、关节炎和脑膜炎等为特征。主要在断奶前后和保育阶段发病，通常见于 5～8 周龄的仔猪，发病率一般为 10%～15%，死亡率可达 50%。急性病例：往往发生于情况良好的猪，病猪发热（40℃~）。